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【中图分类号】R575.2 【文献标识码】A 【文章编号】1672-3783(2011)10-0237-01

【摘 要 】目的 对比放射免疫法与化学发光法检测透明质酸的差异.方法 根据美国临床实验室和标准化协会(CLSI)EP9-A2评价方案,将放射免疫法作为比较方法,化学发光法为实验方法,评价两种试剂的差异.结果:化学发光法与放免法两种试剂检测临床的差异不显著.结论 化学发光法与放免法检测HA比较实验结果发现偏倚在允许范围.排除操作影响,存在个别差异的样本,可能与试剂方法学有一定关系.


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【关 键 词 】肝纤维化 肝活检 透明质酸(hyaluronic acid, HA) 放射免疫法 化学发光法

透明质酸(hyaluronic acid,HA)是肝纤维化诊断的一项重要指标.研究表明,血清内HA水平和肝纤维化程度呈正相关(P<0.01)[1]?.目前临床实验室检测HA的方法有放射免疫法、酶联免疫法和化学发光法.放射免疫法检测试剂出现较早,临床符合率高、价格便宜,但操作繁琐、有效期短,且存在放射污染,已逐渐不能满足临床是实验的要求;近几年,市场上出现了酶联免疫法和化学发光法检测试剂,其在操作、保质期和安全等方面均较放免法有明显优势,但未见报导不同检测方法的差异.我们根据美国临床实验室和标准化协会(CLSI)EP9-A2评价方案,将放射免疫法作为比较方法,化学发光法为实验方法,评价两种试剂的差异并进行偏差估计.?

一、材料与方法

血清和质控:

1 血清样品:新鲜人血清40份,郑州人民医院消化内科住院的慢性肝病患者31例,平均年龄46岁;体检人员9例,平均年龄44岁.新鲜人血清收集后分装,置于-80℃冰箱保存,保存时间不超过一周.

2.质控品:厂家提供.

二、比对方法和评价方法的材料

1 比较方法的仪器和试剂:采用上海原子核研究所日环仪器一厂SN-682型放射免疫计数器,北京北方生物技术研究所透明质酸检测放免药盒.

2 实验方法的仪器和试剂:安图实验仪器公司的LUMO化学发光检测仪,郑州安图绿科生物工程有限公司透明质酸化学发光法检测试剂.

三、评价方法

验证精密度:每日测2批质控,实验间隔>2 h,每个样本作双份测定,连续20 d,对结果进行批内、批间、日间精密度评估;若总CV超过15%,停止评价,查找原因[2].

验证线性范围:参照EP06A进行验证评价,以保证标本中HA含量在线性范围内,否则剔除标本重做[2].

方法学比对:每天分析8个样本,按照1,2,3,4,5,6,7,8,8,7,6,5,4,3,2,1的样本顺序进行测定,持续5天,两种方法比对同时进行[3].实验过程中,每个实验加做两个质控,并做重复,若出现失控,实验重做;如果少于50%标本的HA含量低于120ng/ml,则补做标本.统计计算参照EP09-A2进行.

三、结果

1 方法内离群点分析:两方法均未出现方法内的离群点.

2 方法间离群点分析: 第15份样本明显离群,该患者为肝硬化病人,经验证查明非操作失误导致,可能与方法学差异有关,因此补做一份标本,测定值如表2所示.


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183.4 182.9

3.两方法间双份测定均值的散点图.见图1.

4.两方法重复测定的均值之差-对比方法重复测定均值的偏差图.见图2.

5.计算估计偏倚和其置信区间.见表3.

讨论

实验室准备用一个新的检测系统或方法进行病人标本测定前,应和原有的检测系统或者公认的参考方法一起检测一批病人样品,从测定结果间的差异了解新检测系统或方法引入后的偏倚,如果偏倚不大,或者偏倚在允许误差范围内,说明两种检测系统或方法对病人样品测定结果基本相符,新检测系统或方法不会对临床引入明显偏倚[2].

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肝纤维化是肝脏弥漫性的、过量的细胞外基质沉积, 是细胞外基质沉积过多或降解不足的直接后果,并且肝纤维化是肝硬化的早期病理基础.目前常规肝功能试验无法诊断肝纤维化或早期肝硬化.肝活检为创伤性检查,不能判断肝纤维化的活动度,且难以动态观察[4].肝纤维化程度越重,血清纤维化指标出现异常的可能性越大.因此.临床上检测肝纤维化血清标志物更有实用价值.肝病患者肝组织的炎症活动度与肝纤维化程度呈正相关,其中HA反映炎症程度较敏感.目前,国内报道较多的指标有HA、PⅢNP、 I、 Ⅳ型胶原、L N、PCⅢ、PLD等.HA、LN、PⅢNP、CⅣ都是肝细胞外基质代谢过程中的一部分, 都是肝纤维化和基质沉积相关的直৶

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9;指标.

HA由间质细胞合成, 它反映肝脏纤维化活动程度和肝脏损伤程度,有研究显示HA是反映肝纤维化最具价值的血清学标志物[5].研究亦证实血清肝纤维化指标与肝脏病理分级、分期呈正相关,肝纤维化指标水平越高,肝脏病理损害也较重.因此生化指标和肝组织病理学纤维化程度之间的相关性,有助于肝纤维化的非创伤性诊断.本研究结果显示,化学发光法检测HA与放免法比较,偏倚在允许范围.但是还是存在个别差异的样本,且排除操作影响,可能与试剂方法学有一定关系.

参考文献

[1] 黄建民,蔡卫民.肝纤维化诊断中血清透明质酸检测的临床意义[J].南京医科大学学报,1994,14(4):619-620

[2] 冯仁丰.临床检验质量管理技术基础[M]. 3版.上海:上海科学技术文献出版社,2007:1

[3] 张建忠,沈春燕.两检测测系统测定血清电解质的方法学对比与偏差评估[J].现代医学杂志,2006,21(6):22-24

[4] 马景德.肝纤维化的实验诊断进展[J].实用医药杂志,2002, 19:7 4

[5] 陆伦根,曾德明.肝纤维化的诊断和评估[J].中华肝脏病杂志 2005, 13:603~604

作者单位:450000 河南郑州人民医院检验科


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