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【摘 要】无论是在组织胚胎学等医学基础课中,还是在临床检验工作中,冰冻切片都有着举足轻重的作用,冰冻切片被广泛的运用在科研、教学和临床诊断中.所谓冰冻切片就是组织在低温状态下在很短的时间内变硬并进行切片.在临床外科手术中常常需要进行快速病理诊断,而冰冻切片就是一个很好的方法.
【关 键 词】冰冻切片；制作；体会
【中图分类号】R197.324【文献标识码】A【文章编号】1004-4949（2013）11-71-02
冰冻切片是一种在低温的条件下使组织快速冷冻到一定的硬度然后进行切片的方法.其制作过程简单方便快捷,在手术中快速进行病理诊断从而为手术在中快速确定组织性质,对医生的手术方案具有指导意义.冰冻切片的组织在送检前不需要进行处理,其组织没有发生变化,使得原来的生活形态得以保持,特别是在免疫组织化学染色中,组织中的糖、酶、抗原、脂类等成分由于没有受到干扰而存在,组织中的细胞抗原的免疫性也得到了保存,对于需要检测糖、酶、抗原、脂类的不会受到影响.但是,冰冻切片的制作过程要比普通的蜡切片难度大、要求高,而且组织冰冻的程度不好把握,在切片的过程中组织较易破碎,很难切成符合要求的薄片,在染色的过程中很容易脱片,所有以上这些因素都会影响到切片的质量,从而影响到了检测结果.对于如何能有效快速高质量的制作符合要求的冰冻切片一直使我们面对的问题.
1材料和方法
1.1材料：恒冷切片机,切片刀,固定液
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1.2方法：采用新鲜的实验用的新鲜组织,取一块大小为1.5cm×1.5cm×3cm的新鲜实验用组织,去除组织中的脂肪组织,在取组织的时候要注意保持干燥以免引起组织细胞发生变性和变化,把组织放在低温液氮中快速冷冻放置于冰冻台上.在切片机内快速冰冻2分钟之后待切.如果组织的体积较大冰冻时间相应延长,如果所取组织体积较小则相应的缩短冰冻时间,切片刀的温度控制在零下25℃-零下30℃之间.在开始切片之前要对切片刀和防卷板之间的角度进行调整以防切出来的组织薄片卷曲.使用有粘结剂的载玻片把切下来的薄片直接吸附,这个过程要迅速的完成,以免产生皱折,随后立即放入固定液中1分钟.把固定好的切片在自来水中稍作洗涤,随后放入已经预热到40℃的苏木素染色液中染色1分钟,水洗之后使用1%的盐酸乙醇分化,再次水洗后放入37℃的温水中蓝化,随后放入到37℃复制伊红染液中染色1分钟,上行递度酒精（70%、80%、95%、100%）加温到37℃左右逐级脱水,电吹风吹干,不用二甲苯透明,中性树胶直接封周即可.
2结果
根据这种方法做出来的冰冻切片具有较好的效果,而且方法相对较为简单、节约时间,全部过程大约在一刻钟左右.冰冻切片较为完整、无冰晶裂隙、组织细胞形态结构清晰分明、厚薄均匀、无脱片现象、胞核显鲜明的蓝色细胞质染成粉红色颜色对比鲜艳,切片质量优良,组织染色理想.细胞抗原的免疫性得以保存,组织中的糖、酶、抗原、脂类等成分由于没有受到干扰而存在.
3讨论
冰冻切片是利用迅速冷冻从而使新鲜组织中的水分结冰变硬的原理.包埋剂起托起组织和黏固组织的作用,将组织固定在标本托上短时间内冻好进行切片.所以冰冻切片的质量和两个方面的因素有关：（1）第一个是组织的冰冻程度,组织的冰冻程度和切片的质量有着很大的关系,在冰冻的过程中如果中如果冰冻不足或者冰冻过很都会影响到切片的质量,只有冰冻到恰好的程度才可以切成质量较高的切片；（2）切片刀的锋利程度,切片刀的锋利程度会直接影响到切片的质量的,只有锋利的刀锋才能够快速的切成符合要求的切片,钝的刀锋是不可能切出符合要求的切片的.对于不同的器官、不同质地、组织的大小不同、不同的组织需要采用针对性的处理措施.①为使组织不发生冰晶,在制取组织标本时不可以使用水或者生理盐水冲洗,也不可以把组织浸泡到酒精或生理盐水中,所使用的器械要保持干燥；因为如果在制取组织时带有水分的话会引起细胞间针状裂隙,导致组织正常结构改变.再者,切片机内的温度要适当的控制在零下25℃-零下30℃之间时间控制在10分钟左右,贴片后立即用电吹风吹干后人固定液固定1～2分钟,再吹干,尽量避免缓慢冷冻造成过多的冰晶形成.②包埋剂经常使用的是进口材料,有资料报道胶水的包埋效果也可以,可以节约一部分成本.③掌握好最佳的切片温度,组织在冷冻的过程中一旦达到中央透明消失就要及时进行固定和切片,这时为最佳切片时机.④冰冻切片在切片的时候,切片机的切片刀与防卷片板之间的角度尤为重要,一般在5°的夹角时效果最好；切片完成后要迅速的贴片,不然组织切片的温度升高,切片变软无法贴片为了防止脱片,除了预先在载片涂上黏附剂.⑤组织固定液要选择穿透力强的液体,可以使蛋白质迅速沉淀,同时又可以让细胞的染色构架清楚.⑥组织的染色结果和温度的关系较为密切,在染色之前把染色液预热到37℃,其染色效果要优于偏离此温度的染色液所染的色.染色之后使用37℃的乙醇逐级脱水,可以保持糖、酶、抗原、脂类等化学成分不发生变化.⑦脱水后要直接封片,可以缩短制片时间和节约二甲苯试剂,减少了污染和保护了工作人员.
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参考文献
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