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doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.05.251doi:10.3969/j.issn.1007-614x.2012.05.251
冷冻切片是借助在低温的条件下,使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法.冷冻切片技术距今已近有100多年的历史,主要在外科手术中确定病变性质,了解肿瘤的扩散情况,包括肿瘤是否浸润相邻组织,有无区域淋巴结转移等及手术切缘有无肿瘤组织残留.因此,制作一套高质量的冷冻切片对于确保病理诊断的科学性、可靠性是极其重要的.如今,绝大多数的医院都有国产或国外的冷冻切片机,冷冻切片已经成为病理科的日常工作,成为病理科不可缺少的一部分.
冷冻切片是借助在低温的条件下,使组织迅速冻结达到一定硬度进行切片的一种方法.冷冻切片技术距今已近有100多年的历史,主要在外科手术中确定病变性质,了解肿瘤的扩散情况,包括肿瘤是否浸润相邻组织,有无区域淋巴结转移等及手术切缘有无肿瘤组织残留.因此,制作一套高质量的冷冻切片对于确保病理诊断的科学性、可靠性是极其重要的.如今,绝大多数的医院都有国产或国外的冷冻切片机,冷冻切片已经成为病理科的日常工作,成为病理科不可缺少的一部分.
资料与方法
资料与方法
一般资料：2004年4月～2010年12月将我院手术中的各种送检活体组织标本,使用仪器德国莱卡-3050s型冷冻切片机制作病理冷冻切片.
一般资料：2004年4月～2010年12月将我院手术中的各种送检活体组织标本,使用仪器德国莱卡-3050s型冷冻切片机制作病理冷冻切片.
方法：冷冻温度一般在-21～-25℃之间,使用OCT包埋剂.细小组织全部取材,大组织的取材大小为1cm×1cm×0.5cm,在包埋冻头上加少量冷冻包埋剂,在包埋剂未完全冻结之前放上组织,然后在示组织大小加适量包埋剂.冻好的组织先粗刨修,暴露组织最大切片后再进行切片.冷冻切片厚度以5～8μm为宜,将组织切片展平贴于载玻片上.冷冻切片在95%酒精内固定1～2分钟,自来水充分浸洗,哈瑞士苏木素染色1～2分钟,水洗,1%盐酸酒精分化3～10秒,水洗,0.1%氨水蓝化3～5秒,水洗,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树脂封片.
方法：冷冻温度一般在-21～-25℃之间,使用OCT包埋剂.细小组织全部取材,大组织的取材大小为1cm×1cm×0.5cm,在包埋冻头上加少量冷冻包埋剂,在包埋剂未完全冻结之前放上组织,然后在示组织大小加适量包埋剂.冻好的组织先粗刨修,暴露组织最大切片后再进行切片.冷冻切片厚度以5～8μm为宜,将组织切片展平贴于载玻片上.冷冻切片在95%酒精内固定1～2分钟,自来水充分浸洗,哈瑞士苏木素染色1～2分钟,水洗,1%盐酸酒精分化3～10秒,水洗,0.1%氨水蓝化3～5秒,水洗,梯度酒精脱水,二甲苯透明,中性树脂封片.
注意事项
注意事项
手术送检的标本要新鲜、干燥、完整,未进行过固定.太小组织如肝穿、肾穿等组织可以放在用生理盐水浸湿的纱布上.取材时在不影响病理诊断的前提下,标本取材尽量小一点,组织厚度不＜3mm,这样有利于组织的快速冻结.应尽量避开坏死及有钙化的区域,对于乳腺组织及淋巴结的取材,应尽量将多余脂肪剔除.含骨的组织不建议做冷冻切片.要剔除手术中残留的线头、细小铁丝、钢钉等杂物.
手术送检的标本要新鲜、干燥、完整,未进行过固定.太小组织如肝穿、肾穿等组织可以放在用生理盐水浸湿的纱布上.取材时在不影响病理诊断的前提下,标本取材尽量小一点,组织厚度不＜3mm,这样有利于组织的快速冻结.应尽量避开坏死及有钙化的区域,对于乳腺组织及淋巴结的取材,应尽量将多余脂肪剔除.含骨的组织不建议做冷冻切片.要剔除手术中残留的线头、细小铁丝、钢钉等杂物.
用干净的滤纸充分吸干组织中多余的水分,能有效的减少冰晶的产生.冷冻组织含游离水分过多,组织未吸干水分就直接包埋,切片中冰晶形成的区域无细胞组织结构,呈结晶样或不规则空隙,周围组织因为冰晶影响,组织结构不同程度破坏,细胞收缩,细胞核明显变小,不利于诊断.
用干净的滤纸充分吸干组织中多余的水分,能有效的减少冰晶的产生.冷冻组织含游离水分过多,组织未吸干水分就直接包埋,切片中冰晶形成的区域无细胞组织结构,呈结晶样或不规则空隙,周围组织因为冰晶影响,组织结构不同程度破坏,细胞收缩,细胞核明显变小,不利于诊断.
细小组织为便于切片需将其体积增大,可以OTC包埋剂支撑其底部(起垫高组织的作用),待其凝固后修平,然后将微细组织的待切面朝上放入垫高的OTC包埋剂中,再涂上适量包埋剂.
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细小组织为便于切片需将其体积增大,可以OTC包埋剂支撑其底部(起垫高组织的作用),待其凝固后修平,然后将微细组织的待切面朝上放入垫高的OTC包埋剂中,再涂上适量包埋剂.
软脆的组织如甲状腺、脑组织、肝组织及一些质地脆软的肿瘤,切片温度-15～-18℃为宜,温度过低且冷冻时间过久会使组织变硬变脆,切片易出现裂隙.
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软脆的组织如甲状腺、脑组织、肝组织及一些质地脆软的肿瘤,切片温度-15～-18℃为宜,温度过低且冷冻时间过久会使组织变硬变脆,切片易出现裂隙.
含脂肪量较多的组织,因其组织较弱软,内含脂肪空泡,冷冻温度必须要低,切片温度应＜-25℃为宜.并且冷冻时间要适当延长.待脂肪组织完全冻硬后即可切出完整切片.切片时进刀要快,否则切片粘连.
含脂肪量较多的组织,因其组织较弱软,内含脂肪空泡,冷冻温度必须要低,切片温度应＜-25℃为宜.并且冷冻时间要适当延长.待脂肪组织完全冻硬后即可切出完整切片.切片时进刀要快,否则切片粘连.
质地较硬的组织,如子宫肌瘤、子宫颈组织、部分质地较硬的肿瘤等组织,以肉眼待冷冻组织中央反光区尚存光泽时为最佳切片时机.由于组织结构较致密,组织易冷冻过度,组织切片容易出现搓板状或梯田状厚薄不均现象,因此必须注意观察,发现组织与冷冻托接触面冻硬,且组织表面尚有少许光泽时即开始修块.如果冷冻过硬,可以用手贴组织面上,使组织回温再切片.切片时将肌组织上下对角放置,可减少切片的阻力,易切成平整的薄片.
质地较硬的组织,如子宫肌瘤、子宫颈组织、部分质地较硬的肿瘤等组织,以肉眼待冷冻组织中央反光区尚存光泽时为最佳切片时机.由于组织结构较致密,组织易冷冻过度,组织切片容易出现搓板状或梯田状厚薄不均现象,因此必须注意观察,发现组织与冷冻托接触面冻硬,且组织表面尚有少许光泽时即开始修块.如果冷冻过硬,可以用手贴组织面上,使组织回温再切片.切片时将肌组织上下对角放置,可减少切片的阻力,易切成平整的薄片.
切片刀要保持预冷状态,不然会和冷冻组织产生温差,聚集的热量会使切片皱缩,不易完整.切片刀和持刀架上的板块应保持干净,如不干净会导致切片污染、撕裂、切片不完整.切片刀要锋利,切片时手摇轮用力均匀、柔和,速度不宜过快、过慢.要先粗削直到暴露最大面,然后切片.贴附切片时,动作要轻巧,用力均匀,并且载玻片与切下来的组织粘帖时速度要快,否则长时间会有皱褶.
切片刀要保持预冷状态,不然会和冷冻组织产生温差,聚集的热量会使切片皱缩,不易完整.切片刀和持刀架上的板块应保持干净,如不干净会导致切片污染、撕裂、切片不完整.切片刀要锋利,切片时手摇轮用力均匀、柔和,速度不宜过快、过慢.要先粗削直到暴露最大面,然后切片.贴附切片时,动作要轻巧,用力均匀,并且载玻片与切下来的组织粘帖时速度要快,否则长时间会有皱褶.
固定剂及染液、脱水液应经常更换,保持新鲜.切片固定不充分,蛋白质固定不良会导致蛋白质与核酸在染色过程中溶解.结果切片组织结构与细胞形态模糊,细胞边界不清晰,切片在显微镜下观
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