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uspendedinH2O

ExtdWithCHCl3

CHCl3layerH2Olayer

Evapd.Extd.withEtOH

Residue(24.2g)

EtOAClayerH2Olayer

EvapdExtd.withn-BuOH

Residue(17.0g)n-BuOHlayerH2Olayer

Evapd

Residue(138.0g)

Chart1IsolationprocedureofthepoundsfromAlliumcepaL.var.AgrogatumDon.

1.2.2分离和纯化

1.2.2.1氯仿部分的分离和纯化见图2

CHCl3residue(24g)

ColumnchromatographedonSigel

WitheluentA,BandC

Fr.aFr.bFr.c

RecrystallizedRecrystallized

FromEtOHFromMeOH

CompandⅣ(365.5mg)CompandⅢ(354.3mg)

Chart4IsolationprocedureoftheCHCl3fraction

1.2.2.2正丁醇部分的分离和纯化见图3

n-BuOHresidue(100g)

SephadexHP-20

Fr.aFr.bFr.c

ColumnchromatographedonSiget

gelWitheluentF,GandH

Fr.b1Fr.b2

StandovernightColumn

Chromatographed

CompoundⅠ(30mg)onSigel

CompoundⅨ(10mg)CompoundⅧ(40mg)

Chart3Isolationprocedureofthen-BuOHfraction

1.2.2.3乙酸乙酯部分的分离和纯化见图4

EtOACresidue(17.0g)

SephadexLH-20

ElutedwithMeOH

Fr.aFr.bFr.cFr.dFr.e

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ColumnchromatographedDiaionwithRecrystallizdSephadex

onSigelwitheluentDeluentCfromCH3OHLH-20,Recrystallized

RecrystallizedCH3OHfromCH3OH

poundⅦ(100mg)recystallized

Fr.a1Fr.a2CompoundⅤ(589mg)

CompoundⅡ(20mg)CompoundⅥ(40mg)

SephadexLH-20column

ElutedwithMeOHchromatographed

Recrystallizedonsigetwith

EluentE

CompoundⅪ(139.6mg)recrystallized

CompoundⅫ(52.6mg)

Chart4IsolationprocedureoftheEtOACfraction

化学成分鉴定

1.1化合物Ⅰ的鉴定

化合物Ⅰ为白色粉末,mp248-250℃,微溶于吡啶,二甲基亚砜.呈兰色荧光.Molish反应,Liebermann-Burchard反应均呈阴性.分别用改良的碘化铋钾试剂,饱和苦味酸试剂,硫氰酸铬铵试剂进行沉淀反应,均呈阳性.IR(KBr)cm-1:3861,3742,3680,3425,3165,2362,1707,1655,1597,1531,1445,1242,1104,1051,973,825,413.λnm:348,310.5,239.0.元素分析报告书,IR谱,1HNMR谱,13C-NMR谱,1H-1HCOSY谱,HMBC谱分别见附图1-1,1-2,1-3,1-4,1-5,1-6,13C-NMR谱数据见表1.

化合物Ⅱ的鉴定

化合物Ⅱ为白色针状晶体,mp239-240℃,微溶于甲醇,吡啶.呈兰色荧光,Molish反应,Liebermann-Burchard反应均呈阴性.分别用改良的碘化铋钾试剂,饱和苦味酸试剂,硫氰酸铬铵试剂进行沉淀反应,均呈阳性.IR(KBr)cm-1:3861,3742,3679,3295,2927,2361,1707,1634,1532,1464,1260,823,414.元素分析报告书,IR谱,1HNMR谱,13C-NMR谱,1H-1HCOSY谱分别见附图2-1,2-2,2-3,2-4,2-5,13C-NMR谱数据见表2.

三、药理活性

1.材料与方法

1.1动物与试剂

Wistar大鼠,雄性,合格证号:医动字第10-5110,由吉林大学实验动物部提供,甘油三脂(TG),总胆固醇(TC),高密度脂蛋白胆固醇(HDL-c),低密度脂蛋白胆固醇(LDL-c)诊断试剂盒,购于南京建成工程公司.

1.2分蘖葱头提取物A,B的制备

分蘖葱头鲜品4Kg,分成两份,一份样品用30%乙醇回流提取,去溶剂,得浸膏A(135.5g生药/1g浸膏),另一份样品用95%乙醇冷浸,去溶剂,得浸膏B(408g生药/1g浸膏).

1.3营养性肥胖模型的建立:将大鼠随机分成2组,第1组12只,为空白对照组,给予按规定配制的基础饲料,第2组36只,为营养性肥胖模型组,给予营养饲料(营养饲料按100g基础饲料加入10g奶粉,10g猪油,1个鸡蛋,7g白糖配制而成).喂养期间自由饮水,饮食,每日供给饲料2次,45d后形成营养性肥胖模型.

1.4对实验性营养性肥胖大鼠的减肥作用研究

取营养性肥胖模型大鼠36只,随机分为肥胖模型组,提取物A及提取物B3组,每组12只.继续喂高热量饲料,12只空白对照组大鼠喂普通饲料,各组大鼠均自由饮水,饮食.提取物A组每天上午10时灌胃给予分蘖葱头提取物A45mg/kg,提取物B组灌胃给予分蘖葱头提取物B35mg/kg,每天1次,连续15天.实验期末测定各组大鼠的体重,体内脂肪重量(肾后,生殖器周围脂肪),同时测定全血低切(10/s),中切(40/s),高切(120/s)及血浆粘度(120/s).另采血分离血清,测定TG,TC,HDL-c,LDL-c.

2.实验结果

2.1分蘖葱头提取物A,B对肥胖性营养大鼠血脂的影响

由表1可以看出,模型对照组与空白对照组比较,血清TC明显升高,而TG,HDL-c及LDL-c无明显改变.提取物A组和提取物B组与模型对照组比较,血清TC有一定降低趋势,但无统计学意义(P>,0.05),而对血清TG,HDL-c,LDL-c无明显影响.

表1对大鼠血脂的影响(mmol/L,X±S,n等于10)

组别TCTGHDLLDL

空白对照组1.182±0.2220.837±0.1930.325±0.0690.897±0.229

模型对照组1.523±0.209*0.830±0.1710.331±0.0720.869±0.163

提取物A1.398±0.1820.802±0.4680.385±0.0830.882±0.135

提取物B1.476±0.4120.656±0.5880.333±0.0840.840±0.136

与空白对照组比较*P<,0.05

2.2分蘖葱头提取物A,B对营养性肥胖大鼠组织脂肪重量的影响

实验结束后,对大鼠肾后及生殖器周围脂肪进行重量比较.从表2可以看出,与空白对照组比较,模型对照组肾后脂肪,生殖器周围脂肪,肾后脂肪/体重及生殖器脂肪/体重均明显增高(P<,0.01),提取物B组的上述四项指标均显着低于模型对照组(P<,0.01),而提取物A组的生殖器周围脂肪及生殖器脂肪/体重均低于模型对照组(P<,0.01),肾后脂肪及肾后脂肪/体重有减少趋势,但无统计学意义(P>,0.05).

表2对大鼠脂肪重量的影响(g,X±S,n等于10)

组别肾后脂肪生殖器周围脂肪肾后脂/体重生脂/体重

空白对照组3.104±1.0772.118±0.8890.013±0.0050.008±0.003

模型对照组6.796±1.827**4.699±0.954**0.025±0.007**0.017±0.003**

提取物A5.833±1.7333.710±1.154#0.021±0.0080.013±0.005#

提取物B4.722±1.641##3.377±0.877##0.017±0.006##0.012±0.003##

与空白对照组比较**P<,0.01

与模型对照组比较#P<,0.05##P<,0.01

2.3分蘖葱头提取物A,B对营养性肥胖大鼠血粘度的影响

由表3可以看出:分蘖葱头提取物B能降低营养性肥胖大鼠的全血低切粘度,中切粘度,但对高切粘度及血浆粘度无明显影响.分蘖葱头提取物A对营养性肥胖大鼠血粘度无影响.

]

表3对大鼠血液流变学的影响(X±S,n等于10)