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29983;.③二维码的识别,可以使滴加试剂的时候不会产生滴错的现象,避免人工滴加错误,导致假阴性或假阳性结果的发生.④可根据实验员的工作需要,统筹安排,能更加合理高效地利用时间.⑤程序结束后可以保存整个进程,如果出现问题,可以在实验结束后复审,以便查找出问题的原因[10].2.3阳性与阴性对照
每一次免疫组化染色必须严格设立阳性对照和阴性对照[11].我们的方法是,每个抗体都备有一个阳性对照的小蜡块,阳性对照小蜡块的准备：取材的同时,从大体标本中重新取材,制作成大小约为0.4cm×0.3cm×0.3cm的组织块,一起脱水包埋.时间应控制在48h之内,用以保存组织抗原；常规HE切片染色,镜下观察有癌组织后,进行所需抗体表达测定,评估适合作为阳性对照后放置备用.阳性对照小蜡块主要目的针对试剂的不同批次、重新配置、滴度预试验等,用来评估试剂的可靠度.在实验过程中将待测组织与阳性对照小蜡块组织裱于同一张切片（图4）,PBS代替一抗作为阴性对照,然后进行染色,实验结果更可靠、更节约成本,这一方法值得推广应用.
3实验后的标准化管理
3.1染色结果判断的标准化
免疫组化切片应是阳性标记强而非特异性染色淡或无,两者形成鲜明的对比,阳性表达必须在细胞或组织特定的部位,细胞边界清楚；每批染色都要有阳性对照、阴性对照和自身对照才能对染色结果作出正确判断.判断标准常根据阳性细胞的百分比或阳性细胞的染色深度来判断,其颜色深浅反映抗原量的多少.免疫组化染色结果还要结合组织形态学判断是真正的阳性染色而非其他着色.阳性反应分布总是有规律、局限、定位准确和一定形态特征的,如细胞膜着色呈圆形；典型的细胞核着色为均质状,核仁和染色质呈颗粒状着色.细胞浆呈颗粒状（位于细胞器）或纤维状（中间丝或微丝）或弥漫片状（细胞内液、病毒颗粒及吸收蛋白）着色；细胞间质呈纤维条块状着色；若阳性结果定位异常象征着疾病过程.非特异性着色为无规律、无界线、定位不准确且不能重复；结缔组织受染和内源性生物素干扰是最常见的非特异性着色,镜下为均匀细颗粒状的浅棕色,但不会出现在细胞膜或细胞核.
由于免疫组化染色结果是定性指标,不能定量,染色结果判断受到诊断医师的主观因素影响而导致结果差异.为了减少这种差异的发生,我们科室内部采用统一的免疫组化染色结果判定标准,严格按照公认的分级标准进行判定,如乳腺癌ER、PR采用Bessley分级法[12],C-erbB-2采用美国临床肿瘤协会（ASCO）/美国病理学家学院（CAP）HER2检测指南等[13].
3.2实验结果的跟踪、记录
每批次的免疫组化结果,进行质量跟踪记录,对于特别异常的结果,应该分析原因.是新购试剂,还是新配试剂,或者是操作过程中有无异常；全自动免疫组化仪染色的可以把程序调出来复审,然后备注分析的原因,重新设立阳性对照再染色,观察效果,直到问题解决为止.对于一些单位来说,配置的浓缩试剂,在经过一段时间后,也要进行阳性强度的评测,以防止配置时间过长后效价的降低,导致阳性强度的减弱.
3.3试剂的库存管理
实验结束后,需要在“免疫组化试剂登记表”中,对于使用的试剂进行数据的更新,以便及时更换采购试剂.
3.4实验室的清洁、整理
清洁工作场所内的脏污,必要的东西分门别类以一定的顺序放置,保持工作场所干净、整洁.对于使用过的仪器,做好仪器的日常维护,记录使用情况.另外,实验室的卫生对于实验人员也有一定的安全保护作用.
4讨论
免疫组化质量的好坏影响的因素方方面面.要确保免疫组化结果的可靠性和稳定性,加强免疫组化室内质量控制管理,制定相应质控标准尤其重要.笔者结合本科室的实际情况,对实验前、实验中和实验后三个层面可能影响免疫组化染色结果的因素进行分析、总结,制定本科室免疫组化室内质控管理相关细则,在日常工作实践中得到检验.我们发现,标本及时用10%中性福尔马林固定,取材大小适当,组织良好的脱水,切片的厚度适宜并做防脱片处理,选择高压热修复,抗体效价的评估,采用全自动免疫组化仪代替手工操作,并做阳性与阴性对照,依照公认的免疫组化判断标准等因素,是一个相对稳定的免疫组化室内质量控制的条件.各个环节制定相应的质控标准,以达到标准化管理目标.另外每个实验室应当建有本实验室免疫组化检测的SOP文件,所谓的SOP是指StandardOperationProcedure三个单词中首字母的大写,即标准作业程序,就是将某一事件的标准操作步骤和要求以统一的格式描述出来,用来指导和规范日常的工作.定期做好实验室室内质量控制,真正把SOP文件应用到实际工作中去.每一个实验人员在进行免疫组化操作的时候,也应该有严肃的态度和高度的责任心,才能在制片过程中做到一丝不苟,才能做出优秀的切片.制度化、规范化操作是实现标准化操作的前提条件[14,15],全自动免疫组化仪器的使用是必要手段,阳性和阴性对照的设立是结果可信的可靠保证,稳定良好的染色质量和可靠的结果判读才是免疫组化质控标准化管理的最终目的.[参考文献]
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本文网址 http://www.sxsky.net/yixue/010195056.html
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（收稿日期：2013-06-21）
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