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摘 要：从宜昌部分地区猪散养户中随机抽取部分猪血样及疑似高致病性猪蓝耳病病例血样共计１８１份,进行高致病性猪蓝耳病ＲＴ－ＰＣＲ的检测,结果显示２３份为阳性.试验初步证明,随机抽取的１８１头猪中有部分猪感染高致病性猪蓝耳病病原.

关 键 词：高致病性猪蓝耳病；ＲＴ－ＰＣＲ；检测

中图分类号：Ｓ８５８．２８文献标识码：Ａ文章编号：１００７－２７３Ｘ（２０12）05-0012-01

高致病性猪蓝耳病是由猪繁殖与呼吸障碍综合征病毒（ＰＲＲＳＶ）引起的一种以妊娠母猪严重繁殖障碍以及仔猪的呼吸道症状和高死亡率为特征的传染病.该病最早于１９８７年报道于美国南部,现已遍及世界各地,给全球养猪业造成了巨大的经济损失［１］.

２００６年,我国暴发了一种以高热、高发病率和高死亡率为特征的“猪高热综合征”［２］.宜昌地区也暴发了“猪高热综合征”,给当地养殖行业造成了巨大损失.后经诊断为多病原混合感染,其中主要的病原就是高致病性猪蓝耳病病原.本试验就是从当地养殖场随机抽取血样进行高致病性猪蓝耳病病原学检测,为高致病性猪蓝耳病的预防和预警打下坚实基础.

１材料与方法

１．１试验材料

（１）猪全血.从宜昌部分猪场随机抽取１８１份全血,编号为１－１８１.

（２）高致病性猪蓝耳病阳性血清.

（３）引物.参照李彬等［２］的论文设计１对特异性引物.上游引物（Ｎｓｐ２Ｆ）序列为５’－ＴＧＧＧＣＧＡＣＡＡＴＧＴＣＣＣ－３’,下游引物（Ｎｓｐ２Ｒ）序列为５’－ＧＣＴＧＡＧＴＡＴＴＴＴＧＧＧＣＧ－３’.ＰＲＲＳＶ变异株和经典毒株预期扩增产物长度分别为４１８ｂｐ和５０８ｂｐ.

（４）主要试剂.ＲＮＡ提取试剂盒为美国ＯＭＥＧＡ公司产品；ＲＴ－ＰＣＲ试剂盒为大连宝生物公司产品；低分子量蛋白质Ｍａｒｋｅｒ、琼脂糖为ＯＸＯＩＤ产品.

１．２试验方法

１．２．１病毒总ＲＮＡ的提取采集的全血分离后收集血清,ＲＮＡ的抽提按试剂盒说明书进行.

１．２．２反转录反应按ＴａＫａＲａＲＮＡＰＣＲＫｉｔ（ＡＭＶ）Ｖｅｒ３．０说明书进行.反转录产物直接用于ＰＣＲ反应模板或－２０℃保存.

１．２．３ＰＣＲ反应反转录产物１０μＬ,５