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皮瓣、轴型皮瓣、静脉皮瓣远端新生血管形成,防止缺血造成的皮瓣坏死.该研究利用制备的载体AdCMV-VEGF为复制缺陷性腺病毒,能感染真核细胞并表达VEGF,表达的VEGF具有增加血管能透性,促进血管增生的生物学活性.同时建立了生理性皮瓣、非生理性皮瓣缺血模型.进行了基因局部真皮下注射皮瓣预制,局部真皮下应用腺病毒载体具有安全、简便、创伤小特点,远位转染少,外源基因主要在局部表达,对全身影响小.发现腺病毒为载体在体内表达时间短的特点.

融合CD-ES基因治疗恶性肿瘤实验研究

项目简介:研究将两个不同功能的基因(CD、ES)作成融合基因,再导入穿梭质粒,最后通过细菌内重组法及在293细胞内包装、扩增重组腺病毒(rAdCDglyES),使其具有直接杀伤瘤细胞,阻止瘤新生血管形成、间接杀伤瘤细胞和阻止瘤远端转移及放疗增敏作用增强放疗疗效.

抑瘤多肽TSF及其基因治疗载体组合物

项目简介:该发明涉及一种新的重组腺病毒载体介导的抗肿瘤治疗组合物,具有靶向性抗肿瘤组织内血管新生、抑制肿瘤包括造血系统恶性肿瘤生长及转移作用,具体步骤是以特异引物经PT-PCR方法从正常人外周血细胞克隆出编码TSF多肽的cDNA序列,以AdEasySystem在人胚肾细胞293中构建、包装表达TSF的重组腺病毒载体,大规模制备并纯化该载体用于体内外活性测定.

腺病毒介导基因治疗与放疗联合治疗肿瘤研究

项目简介:为提高肿瘤基因治疗的疗效,减少其副作用,研究其与常规的放疗结合.首次将AdCMVIL-12基因疗法与传统放疗联合治疗小鼠Lewis肺癌,发现联合疗法有互相促进作用.体外实验首次证实电离辐射明显提高了腺病毒对Lewis肺癌细胞的转染率,从而提高了IL-12的表达.用放疗与腺病毒介导的IL-12基因联合应用,增加腺病毒转染率,提高了抗肿瘤疗效,降低了副作用.为肿瘤的基因治疗提供新的线索,并将会带来一定的社会效益和经济效益.

HSV-TK和B7联合基因治疗乳腺癌实验研究

项目简介:该试验将HSV―TK、B7基因经逆转录病毒介导,并转导GCV对乳腺癌细胞进行体外细胞、体内荷瘤抗肿瘤作用观察.理论依据为:逆转录病毒载体将外源目的基因整合到靶细胞染色体;HSV―TK被导入细胞后,其TK基因对GCV的敏感性提高并使之磷酸化,竟争性地抑制细胞DNA的合成而杀死肿瘤细胞;HSV―TK/GCV系统具有“旁观者效应”,扩大杀伤范围;将B7基因引入肿瘤细胞后可刺激机体T淋巴细胞的免疫性,使肿瘤细胞具有高免疫原性.


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该试验主要创新点在于在国内外首次将TK/B7不同的目的基因联合应用治疗乳腺癌,观察到治疗上的协同性,取得了满意的效果,在晚期乳腺癌的治疗方面有良好的推广应用前景.

门静脉高压症时一氧化氮在发病中的作用及基因治疗研究

项目简介:肝内阻力增加是肝硬化门静脉高压症(PHT)的始动因素,而由血管活性物质增多引起的高动力循环在PHT的维持中起重要作用.该研究旨在探讨一氧化氮(NO)在PHT发病机理中的作用以及一氧化氮合酶(NOS)基因治疗PHT的效果.

该研究从分子水平系统阐明了NO在PHT发病机理中的重要作用,进一步阐明了PHT的发病机理;首次应用免疫豁免原理进行FasL-NOS联合基因治疗PHT的研究,为PHT的治疗开辟了新的途径.对NOS基因治疗PHT目前还停留在动物实验阶段,进入临床应用尚存在治疗效果的评价、基因治疗的安全性和治疗效费比等问题.

导入人组织激肽释放酶基因治疗肾性高血压实验研究

项目简介:该项目利用基因工程技术,提取正常人胰腺组织RNA,采用oligo(dT)引物进行RT-PCR.回收PCR产物,插入质粒KS.利用高保真pfuTaq酶扩增激肽释放酶基因片段,产物酶切处理后,和不同载体片段用T4连接酶连接,完成原核、真核载体的构建.将连接产物转化、转染不同的细菌、细胞,筛选克隆,按照不同载体的要求,选择最佳的实验条件进行人胰腺激肽释放酶的表达.应用改良的电位滴定法,分析重组人胰腺组织激肽释放酶活性.项目克隆人组织激肽释放酶基因并进行序列分析,构建人组织激肽释放酶基因表达载体,筛选高效表达菌株,进行重组人组织激肽释放酶的制备及活性分析.

基因联合放疗、化疗、免疫对结直肠癌复发转移治疗研究

项目简介:该项目针对了临床实体肿瘤治疗的重点与难点和目前基因治疗方法上的缺陷和不足.将基因治疗与放疗、化疗和免疫治疗相结合,为结直肠癌局部复发、转移和其他实体瘤的治疗提供了新的手段和方法,也为肿瘤基因治疗的临床应用探索了新途径.采用双启动子调控目的基因的表达,提高了基因治疗的靶向性和安全性.放射线促CD基因转染刺激DCs激活T细胞的作用可用于制备肿瘤疫苗,提高肿瘤疫苗的安全性和特异性.该研究结果为进一步研发具有自主知识产权的针对结直肠癌复发和转移的重组双启动子调控自杀基因治疗药物奠定了实验基础.

株单纯疱疹病毒胸苷激酶基因及其应用

项目简介:该技术应用于恶性肿瘤基因治疗.以Ⅰ型中国株单纯疱疹病毒(HSV-I)的DNA为模板,用PCR技术克隆到中国的单纯疱疹病毒胸苷激酶基因,命名为HSVⅠ-TKc;构建含TKc基因的重组逆转录病毒载体pLTKcSN,转导PA317包装细胞,建立能产生还TKc基因假型逆转录病毒的病毒包装细胞pLTKcSN/VPC(VPC为病毒载体生产细胞),并测定细胞上清液中病毒滴度;在此基础上,运用PA317(pLTKcSN)包装细胞株配合GCV模拟临床过程来治疗实体肿瘤,取得了一定效果.

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